RESUMO
INTRODUCTION: This study was done to evaluate the mechanism involved in stem cell factor (SCF) expression and production by lipopolysaccharide (LPS)-stimulated odontoblast (OD)-like cells and to investigate the signal transduction pathway activated in the process. METHODS: ODs-like cells (MDPC-23) were stimulated with different LPS concentrations for 1, 6, and 24 hours. SCF expression in OD-like cells was analyzed by reverse-transcriptase polymerase chain reaction, and SCF production was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay. In another set of experiments, OD-like cells were pretreated with dexamethasone (DEX), MK886 (MK), p42/44 inhibitor (PD 98059 [PD]), p38 inhibitor (SB 202190 [SB]), or PI3K inhibitor (wortmannin [Wort]) for 30 minutes followed by stimulation with LPS (0.1 µg/mL) for 1 hour. RESULTS: OD-like cells stimulated with LPS (0.1 µg/mL) for 1 hour expressed SCF, but SCF production decreased with increasing LPS concentrations (1, 10, and 100 µg/mL). DEX and MK were able to inhibit SCF messenger RNA (mRNA) expression. PD, SB, and Wort inhibited the SCF mRNA expression. CONCLUSIONS: LPS-induced SCF mRNA expression and production in OD-like cells occur via leukotriene production or cytokine and/or chemokine formation, activating the p42/44, p38, and PI3K pathways. Data suggest that SCF released by OD-like cells may act as immune response modulators.
Assuntos
Lipopolissacarídeos/farmacologia , Odontoblastos/efeitos dos fármacos , RNA Mensageiro/efeitos dos fármacos , Fator de Células-Tronco/efeitos dos fármacos , Androstadienos/farmacologia , Proteínas Quinases Dependentes de Cálcio-Calmodulina/antagonistas & inibidores , Técnicas de Cultura de Células , Linhagem Celular , Dexametasona/farmacologia , Relação Dose-Resposta a Droga , Flavonoides/farmacologia , Regulação da Expressão Gênica/efeitos dos fármacos , Glucocorticoides/farmacologia , Humanos , Imidazóis/farmacologia , Indóis/farmacologia , Inibidores de Lipoxigenase/farmacologia , Sistema de Sinalização das MAP Quinases/efeitos dos fármacos , Proteína Quinase 1 Ativada por Mitógeno/efeitos dos fármacos , Proteína Quinase 3 Ativada por Mitógeno/efeitos dos fármacos , Odontoblastos/metabolismo , Inibidores de Fosfoinositídeo-3 Quinase , Piridinas/farmacologia , RNA Mensageiro/antagonistas & inibidores , Transdução de Sinais/efeitos dos fármacos , Fator de Células-Tronco/genética , Fatores de Tempo , Wortmanina , Proteínas Quinases p38 Ativadas por Mitógeno/antagonistas & inibidoresRESUMO
Avaliar a expressão de SCF e FGF-2 por odontoblastos (OD) estimulados por LPS, via p42/44, p38 e PI3K no processo. OD line MDPC-23 murino células foram estimuladas com 0,1, 1, 10 e 100 μg / ml LPS por horas 1, 6 e 24. A expressão de SCF e FGF-2 no OD foi avaliada por RT-PCR. Produção de SCF no sobrenadante da cultura foi analisado por ELISA. Examinar se a expressão de SCF e FGF 2eram e produção de citocinas dependentes / ou presença de leucotrienos, as células foram pré-tratados com dexametasona (DEXA) e MK886 (MK) por 30 minutos e então estimulados com LPS (0, 1 μg / mL) para 1 hora. Para avaliar as vias de transdução de sinal, as células foram pré-tratados por 30 minutos com um inibidor específico para p42/44 (PD98059, PD), p38 (SB203580, SB) e PI3K (wortmannin, Wort), logo depois foram estimulados com LPS (0.1μg / mL) por 1 hora. Células estimuladas por LPS após 1 hora expressar SCF em uma concentração de 0,1 μg / mL com concentrações decrescentes de 1, 10 e 100, seguidos por períodos de 6 e 24 hous. A expressão do FGF 2 em odontoblastos estimulados por LPS eram capazes de induzir concentrações 0,1 e 10 μg/mL 1 hora após. A DEXA e MK foram capazes de inibir a expressão de mRNA para SCF e FGF-2. PD, SB e Wort bloqueou a indução da expressão do SCF e FGF-2. DEXA e MK inibiu a expressão de SCF e FGF-2 através da ativação de p42 / 44, p38 e PI3K. : Os dados sugerem que SCF e FGF-2 liberados pela OD podem atuar como moduladores da resposta imune e reparação os tecidos após a inflamação, levando à produção de mediadores químicos que participam na formação de novos tecidos de celulares
Evaluate the expression of SCF and FGF-2 by odontoblasts (OD) stimulated by LPS, via p42/44 , p38 and PI3K in the process. OD line MDPC-23 murine cells were stimulated with 0.1, 1, 10 and 100 μg / mL LPS for 1, 6 and 24 hours. The expression of SCF and FGF-2 in OD was evaluated by RT-PCR. Production of SCF in the culture supernatant was analyzed by ELISA. To examine whether the expression of SCF and FGF 2eram dependent cytokine production and / or presence of leukotriene, cells were pretreated with dexamethasone (DEXA) and MK886 (MK) for 30 minutes and then stimulated with LPS (0 , 1 μg / mL) for 1 hour. To evaluate signal transduction pathways, cells were pretreated for 30 minutes with a specific inhibitor for p42/44 (PD98059, PD), p38 (SB203580, SB) and PI3K (wortmannin, Wort), soon after were stimulated with LPS (0.1μg/mL) for 1 hour. Cells stimulated by LPS after 1 hour express SCF in a concentration of 0.1 μg / mL with decreasing concentrations of 1, 10 and 100, followed by periods of 6 and 24 hous. The expression of FGF 2 in odontoblasts stimulated by LPS were capable of inducing concentrations 0.1 and 10ug/mL 1 hour after. The DEXA and MK were able to inhibit the expression of mRNA for SCF and FGF-2 . PD, SB and Wort blocked the induction of expression of the SCF and FGF-2. DEXA and MK inhibited the expression of SCF and FGF-2 via activation of p42 / 44, p38 and PI3K. The data suggest that SCF and FGF-2 released by the OD can act as modulators of immune response and tissue repair after inflammation, leading to production of chemical mediators
Assuntos
Polpa Dentária , Inflamação , OdontoblastosRESUMO
Avaliar a expressão de SCF e FGF-2 por odontoblastos (OD) estimulados por LPS, via p42/44, p38 e PI3K no processo. OD line MDPC-23 murino células foram estimuladas com 0,1, 1, 10 e 100 μg / ml LPS por horas 1, 6 e 24. A expressão de SCF e FGF-2 no OD foi avaliada por RT-PCR. Produção de SCF no sobrenadante da cultura foi analisado por ELISA. Examinar se a expressão de SCF e FGF 2eram e produção de citocinas dependentes / ou presença de leucotrienos, as células foram pré-tratados com dexametasona (DEXA) e MK886 (MK) por 30 minutos e então estimulados com LPS (0, 1 μg / mL) para 1 hora. Para avaliar as vias de transdução de sinal, as células foram pré-tratados por 30 minutos com um inibidor específico para p42/44 (PD98059, PD), p38 (SB203580, SB) e PI3K (wortmannin, Wort), logo depois foram estimulados com LPS (0.1μg / mL) por 1 hora. Células estimuladas por LPS após 1 hora expressar SCF em uma concentração de 0,1 μg / mL com concentrações decrescentes de 1, 10 e 100, seguidos por períodos de 6 e 24 hous. A expressão do FGF 2 em odontoblastos estimulados por LPS eram capazes de induzir concentrações 0,1 e 10 μg/mL 1 hora após. A DEXA e MK foram capazes de inibir a expressão de mRNA para SCF e FGF-2. PD, SB e Wort bloqueou a indução da expressão do SCF e FGF-2. DEXA e MK inibiu a expressão de SCF e FGF-2 através da ativação de p42 / 44, p38 e PI3K. : Os dados sugerem que SCF e FGF-2 liberados pela OD podem atuar como moduladores da resposta imune e reparação os tecidos após a inflamação, levando à produção de mediadores químicos que participam na formação de novos tecidos de celulares.
Evaluate the expression of SCF and FGF-2 by odontoblasts (OD) stimulated by LPS, via p42/44 , p38 and PI3K in the process. OD line MDPC-23 murine cells were stimulated with 0.1, 1, 10 and 100 μg / mL LPS for 1, 6 and 24 hours. The expression of SCF and FGF-2 in OD was evaluated by RT-PCR. Production of SCF in the culture supernatant was analyzed by ELISA. To examine whether the expression of SCF and FGF 2eram dependent cytokine production and / or presence of leukotriene, cells were pretreated with dexamethasone (DEXA) and MK886 (MK) for 30 minutes and then stimulated with LPS (0 , 1 μg / mL) for 1 hour. To evaluate signal transduction pathways, cells were pretreated for 30 minutes with a specific inhibitor for p42/44 (PD98059, PD), p38 (SB203580, SB) and PI3K (wortmannin, Wort), soon after were stimulated with LPS (0.1μg/mL) for 1 hour. Cells stimulated by LPS after 1 hour express SCF in a concentration of 0.1 μg / mL with decreasing concentrations of 1, 10 and 100, followed by periods of 6 and 24 hous. The expression of FGF 2 in odontoblasts stimulated by LPS were capable of inducing concentrations 0.1 and 10ug/mL 1 hour after. The DEXA and MK were able to inhibit the expression of mRNA for SCF and FGF-2 . PD, SB and Wort blocked the induction of expression of the SCF and FGF-2. DEXA and MK inhibited the expression of SCF and FGF-2 via activation of p42 / 44, p38 and PI3K. The data suggest that SCF and FGF-2 released by the OD can act as modulators of immune response and tissue repair after inflammation, leading to production of chemical mediators.
